Синтез кДНК
- Підготовка зразків: Зразки РНК готують і очищають за допомогою відповідної методики, що базується на цілях експериментів.
- Видалення геномної ДНК: це етап очищення РНК. …
- Вибір зворотної транскриптази: виберіть зворотну транскриптазу на основі вимог ваших результатів.
кДНК утворюється в два основні етапи: (а) спочатку, мРНК виділяють з іншої клітинної РНК за допомогою елююючої колонки. (b) По-друге, фермент зворотна транскриптаза синтезує ланцюги ДНК, використовуючи молекули мРНК як матриці.
На першому кроці кДНК синтезується з використанням праймера RT, який містить адаптер відомої послідовності на 5'-кінці. Цей праймер у поєднанні з матрицею перемикаючого олігонуклеотиду (TSO) генерує кДНК, що містять адапторні послідовності як на 5', так і на 3' кінцях.
Протокол створення бібліотеки кДНК
- Виділення мРНК. Перш за все, це включає виділення загальної мРНК з типу клітини або тканини, що представляє інтерес. …
- Синтез першого ланцюга кДНК. …
- Другий ланцюг генерації кДНК. …
- Включення кДНК у вектор. …
- Клонування кДНК.
РНК може бути перетворена в кДНК за допомогою ферменту зворотної транскриптази. Цей фермент вперше був виявлений у клітині-хазяїні, зараженій ретровірусом. Ретровірус має гени, які кодують зворотну транскриптазу. Цей фермент використовує РНК як матрицю для синтезу ДНК.