хроматографія – це техніка, яка використовується для виділення білка або білкових комплексів з біохімічної суміші. Він заснований на взаємодії макромолекулярного зв’язування між цікавим білком і буфером для елюції. Білки з найменшою спорідненістю з буфером для елюції елюювати спочатку. 15 грудня 2021 р
Теоретично при будь-якому значенні pH, білки повинні елююватися в порядку їх чистого заряду, тобто на аніонообмінній колонці чистий негативно заряджений білок буде елююватися після позитивно зарядженого білка. Однак локалізовані концентровані області сумарного негативного або позитивного заряду можуть впливати на порядок елюції.
Процедура використання афінних адсорбентів при очищенні біомолекул досить проста і включає серію послідовних етапів.
- 5.2. 1 Афінний адсорбент. Ліганд спочатку ковалентно з'єднується з опорою. …
- 5.2. 2 Врівноваження. …
- 5.2. 3 Завантаження. …
- 5.2. 4 Прання. …
- 5.2. 5 Елюювання.
Найбільш широко використовуваним буфером для елюції для афінного очищення на основі взаємодії білків є 0,1 М гліцин•HCl, pH 2,5-3,0. Цей буфер ефективно роз’єднує більшість взаємодій зв’язування білок:білок і антитіло:антиген без постійного впливу на структуру білка.
Для елюції використовується надлишкова кількість сполуки, здатної діяти як ліганд іонів металу, наприклад імідазол. GST має спорідненість до глутатіону, який комерційно доступний у вигляді глутатіон-агарози. Під час елюції, надлишок глутатіону використовується для витіснення міченого білка.
Опубліковано 23 серпня 2023 р. Неполярні сполуки елююються спочатку в техніці колонкової хроматографії. Порядок елюювання з колонки зазвичай наступний: алкілгалогеніди < насичені вуглеводні < ненасичені вуглеводні < прості ефіри < складні ефіри < кетони < аміни < спирти < феноли < кислоти.