The рекомбінантний інгібітор мишачої РНКази від
є найкращим захистом від всюдисущих РНКаз (РНКаз A, B, C). Завдяки точковій мутації порівняно зі звичайними (людськими/свинячими) інгібіторами РНКази варіант NEBs є більш активним в експериментах – навіть із нижчими концентраціями DTT!
NEB пропонує три окремих інгібітори рибонуклеази (інгібітори РНКази); Рибонуклеозид-ванадиловий комплекс (NEB #S1402) може бути використаний у методах фракціонування клітин, а також у центрифугуванні в градієнті сахарози для інгібування різних рибонуклеаз; тоді як інгібітор РНКази, плацента людини (NEB #M0307) або інгібітор РНКази, мишачий (NEB …
DEPC-лікування є найпоширенішим методом, який використовується для інактивації РНКаз у воді та буферах. Однак деякі реагенти, такі як Tris, не можуть бути оброблені DEPC. Ambion пропонує різноманітні буфери та воду (DEPC та необроблену DEPC), які гарантовано не містять РНКази.
Традиційним методом боротьби з РНКазами у ферментативних реакціях, таких як транскрипція in vitro, зворотна транскрипція та трансляція, є використовувати інгібітор рибонуклеази. Цей білок є інгібітором лише сімейства рибонуклеаз РНКази A, яка включає РНКази A, B і C.
Для стандартної реакції зворотної транскрипції використовуйте 1 мкл (40 ОД) інгібітора РНКази Hu для кінцевого об’єму зразка 20 мкл. Кінцева концентрація DTT 0,5–1 мМ є важливою для оптимальної активності.
Відповідь: Ми рекомендуємо використовувати інгібітори РНКази під час підготовки зразків клітин, які мають високий рівень РНКаз (таких як гранулоцити) та інших інгібіторних сполук, як описано в наших найкращих практиках роботи з гранулоцитами. Для зразків ядер обов’язковим є використання інгібітора РНКази під час підготовки зразків.